Тезисы. Часть 2

Новое российское устройство для докорма детей сцеженным грудным молоком

Левадная А.В., Шнейдерман М.Г., Коренева О.А., Селиванова И.В., Сивохина А.А., Костычева А.А., Филатова Я.Ю., Алексеенко Г.А., Стоянова Е.Я., Жданова С.И., Омельченко С.В., Пикалова А.А., Нарина Н.С.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация

Актуальность. В последние годы увеличивается число женщин, у которых кормить грудью по ряду причин не получается. На сегодняшний день в РФ около 95% женщин хотят кормить грудью, но только чуть более 40% детей получают грудное молоко в первые полгода жизни.

Лучшим выбором в случае невозможности грудного вскармливания является кормление сцеженным грудным молоком. Оно может быть актуально для женщин с травмами и трещинами сосков, для мам, разлученных с детьми из-за нахождения последних в тяжелом состоянии в отделениях реанимации и интенсивной терапии новорожденных, для женщин после оперативного родоразрешения, для детей, которые не умеют или по каким-то причинам не могут сосать непосредственно из груди и в некоторых других случаях.

При докорме из бутылочки большинство детей отказываются от сосания из груди, что постепенно приводит к завершению грудного вскармливания. Рекомендовано отдавать предпочтение кормлению из альтернативных источников докорма: шприца или поильника. Поильник менее удобен, так как часть молока проливается и не попадает к ребенку. Стандартный медицинский шприц плохо подходит для сцеживания и кормления в силу ряда недостатков: не имеет заглушки на выходе, поэтому молоко, которое мать сцеживает в шприц, вытекает из него, имеет короткий носик для кормления, и из-за этого молоко выливается изо рта ребенка, не позволяет делать перерывы в кормлении без потерь молока из шприца, когда ребенок плачет, устал или заснул.

Цель - разработанное в ФГБУ "НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова" Минздрава России новое медицинское устройство - насадка на шприц для докорма позволяет решить все эти проблемы.

Насадка на шприц для докорма имеет поворотный клапан, который позволяет удерживать молоко в шприце во время сцеживания при отсутствии поршня, перекрывать клапан во время транспортировки шприца, имеет удобный атравматичный носик с небольшим изгибом, что позволяет глубже ввести зонд в рот ребенку, предотвращая вытекание молока изо рта, позволяет полностью сохранять молоко в шприце при вынужденных перерывах в кормлении.

Материал. Новая модель устройства для докорма детей сцеженным молоком представляет собой шприц и мягкий наконечник с клапаном, позволяющий сцеживать молоко в шприц при выдвинутом поршне, перекрывать клапан во время транспортировки шприца, полностью сохранять молоко в шприце при вынужденных перерывах в кормлении, имеет носик удобной длины с небольшим изгибом, что позволяет глубже ввести зонд ребенку в защечное пространство, предотвращая вытекание молока изо рта.

Алгоритм использования устройства: стерильный наконечник (носик) извлекают из стерильной упаковки и соединяют со шприцом. Закрывают поворотный клапан и в шприц сцеживают молоко. Вставляют поршень, открывают клапан и выпускают из шприца воздушную подушку. Вводят кончик мягкого наконечника за щеку и, осторожно нажимая на поршень, подают необходимое количество молока в рот ребенка. При необходимости перерыва в кормлении поворотный клапан закрывают.

Результаты. Устройство протестировано в отделе нутритивных технологий в неонатологии и педиатрии и показало себя как удобный инструмент в клинической практике врача-неонатолога.

Заключение. Устройство очень удобно в клинической практике и может быть использовано для докорма сцеженным молоком детей, которые не умеют или по каким-то причинам не могут сосать грудь и в некоторых других случаях.



Российское устройство для визуализации клеток эмбриона в программах преимплантационного генетического скрининга

Макарова Н.П., Шнейдерман М.Г., Калинина Е.А.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация

Russian device for visualisation of embryo cells in IVF-PGS programms

N.P. Makarova, M.G. Schneiderman, E.A. Kalinina

Kulakov Obstetrics, Gynecology and Perinatology National Medical Research Center of Ministry of Неаlthcare of the Russian Federation, 117997, Moscow, Russian Federation

E-mail: innamike@lmi.net

Актуальность. В современной медицине недостаточно отработан такой важный этап в экстракорпоральном оплодотворении (ЭКО), как процесс предимплантационного генетического скрининга (ПГС) на 24 пары хромосом с целью отбора эмбрионов человека с высоким потенциалом развития для улучшения результатов вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ). Именно введение генетического отбора эмбрионов позволяет специалистам повышать частоту наступления клинической беременности (до 70% в расчете на перенос).

Цель - весьма актуален поиск новых путей, которые бы привели к повышению эффективности программ ЭКО.

Материал и методы. В ФГБУ "НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова" Минздрава России создано медицинское устройство, предназначенное для визуализации сбиопсированных клеток бластоцисты в программах ПГС, увеличивающее вероятность последующей полногеномной амплификации ДНК в образце и снижающее риск контаминации клиническим эмбриологом. Подставка для визуализациии применяется в клинической эмбриологии, гинекологии и репродуктологии.

Результаты. В новом устройстве устранены недостатки прототипа и иных известных методов. Подставка для пробирок типа Эппендорф при полногеномной амплификации позволяет непрерывно визуализировать сбиопсированный материал в течение всего процесса переноса и отбора и существенно снизить риск контаминации от оператора, так как отсутствует контакт рук оператора и пробирки. С помощью нового устройства появилась возможность добиться снижения числа недиагностированных бластоцист до 3-5%, что является общемировым показателем качества программ ЭКО + ПГС на всех этапах помещения клеток трофобласта в пробирку Эппендорфа для последующей полногеномной амплификации и визуализирования сбиопсированного материала. Стерильная герметичная упаковка обеспечивает чистоту процедуры визуализирования сбиопсированного материала.

Алгоритм использования подставки при подготовке образца ткани трофоэктодермы для последующего проведения ПГС/ диагностики следующий: мерильную подставку извлекают из упаковки и помещают на предметный стол стереомикроскопа. Маркированную пробирку помещают в стерильную подставку под углом 45о в соответствующее отверстие. Берут чашку для биопсии с материалом пациента и под контролем стереомикроскопа с помощью флексипета диаметром 140 мкм перемещают сбиопсированный материал из капли в чашке в пробирку Эппендорф в подставке соответственно маркировке. Визуализируют образец ткани трофоэктодермы при увеличении х20 под стереомикроскопом на стенке пробирки.

Для снижения риска контаминации и удобства визуализации клеток эмбриона пробирка удерживается с помощью подставки, а не руками оператора. Пробирки центрифугируют в течение 15 с, а затем помещают их в стерильный контейнер и передают на генетическую диагностику.

Заключение. Таким образом, устройство-подставка для визуализации сбиопсированных клеток бластоцисты в программах ПГС позволяет увеличивать вероятность последующей полногеномной амплификации ДНК в образце и снижает риск контаминации клиническим эмбриологом.



Способ диагностики пролиферативной активности клеток лейомиомы матки

Малышкина Д.А., Воронин Д.Н., Сотникова Н.Ю., Воскресенская Д.Л.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 153045, г. Иваново, Российская Федерация

The method for the diagnosis of proliferative activity of uterine leiomyoma cells

Daria A. Malyshkina, Dmitry N. Voronin, Natalia Yu. Sotnikova, Daria L.Voskresenskaya

Federal State Budget Institute Ivanovo Scientific-Research Institute named after V.N. Gorodkov, 153045, Ivanovo, Russian Federation

E-mail: kasyanikdariakis@mail.ru

Актуальность. Лейомиома матки - доброкачественная гормонально-зависимая опухоль, развивающаяся в миометрии в результате гипертрофии и пролиферации элементов мышечной и соединительной ткани. Она остается одним из самых распространенных гинекологических заболеваний, занимая 2-е место в структуре гинекологической патологии. Разнообразие клинических вариантов данного заболевания диктует необходимость своевременной диагностики наиболее неблагоприятных, к числу которых относят быстрый рост миоматозного узла за счет усиленной пролиферации клеток. Оценка уровня пролиферации клеток возможна только после удаления опухолевой ткани, поэтому необходимо внедрять новые лабораторные малоинвазивные способы дооперационной диагностики пролиферативной активности клеток. Известно, что женщин с высоким уровнем пролиферации в миоматозных узлах относят к группе риска по развитию гиперпластических процессов в эндометрии и молочных железах, а также по развитию кистозных доброкачественных и злокачественных образований в яичниках [1]. Изучение механизмов развития и роста опухоли данного типа выявило особую роль участия иммунокомпетентных клеток, одними из которых являются естественные киллеры (ЕК) [2]. Уровень их цитотоксичности зависит от активации мембранных рецепторов, наиболее значимыми в противоопухолевом иммунитете являются рецепторы естественной цитотоксичности (NCR). С целью предотвращения быстрого роста опухоли, а также для определения эффективной тактики ведения пациенток необходимо разрабатывать малоинвазивные лабораторные способы, позволяющие своевременно диагностировать уровень пролиферативной активности клеток в ткани опухоли.

Цель исследования - разработать критерий оценки пролиферативной активности в ткани миоматозного узла в зависимости от уровня активации эндометриальных естественных киллеров.

Материал и методы. Обследованы 32 женщины репродуктивного возраста с симптомной лейомиомой матки. Материалом для исследования служили биоптаты эндометрия, расположенного в проекции миоматозного узла, полученные в ходе выполнения плановой гистероскопии. Выделение популяции мононуклеарных клеток из эндометрия проводили стандартным безферментативным методом с последующим центрифугированием в градиенте плотности фиколл-урографина. Уровень СD335+С0D336+-клеток в пуле СD56+-лимфоцитов оценивали с помощью моноклональных антител методом проточной цитометрии в лимфоцитарном гейте. Для оценки диагностической значимости исследуемого показателя применялся ROC-анализ.

Результаты. Проведенное исследование позволило выявить пороговый показатель содержания СD335+СD336+-клеток в пуле CD56+ в эндометрии пациенток с лейомиомой матки. Так, при значении CD335+CD336+ эндометриальных ЕК ≤5,4% диагностируют высокую пролиферативную активность клеток миоматозного узла. Считается, что лиганды NCR-рецепторов присутствуют на мембране опухолевых клеток, и в результате активации ЕК через рецепторы данного типа запускается каскад цитотоксических реакций [3]. Полученный диагностический критерий относительного содержания CD335+CD336+-лимфоцитов в пуле CD56+ эндометриальных ЕК позволяет с точностью 81,3% уже при первой постановке диагноза определять уровень пролиферативной активности клеток ткани миоматозного узла, что в дальнейшем позволяет определиться с выбором в отношении таргетной терапии заболевания.

Литература

1. Миома матки / под ред. И. С. Сидоровой. М. : МИА, 2003. 256 с.

2. Chegini N. Proinflammatory and profibrotic mediators: Principal effectors of Leiomyoma development as a fibrotic disorder // Semin Reprod Med. 2010. Vol. 28, N 3. P. 180-203.

3. Pazina T. et al. Regulation of the Functions of Natural Cytotoxicity Receptors by Interactions with Diverse Ligands and Alterations in Splice Variant Expression // Front Immunol. 2017. Vol. 30, N 8. P. 369.



Применение масс-спектрометрического метода типирования высоковирулентных клонов стрептококка группы B в прогнозировании риска развития неонатальных инфекций

Мелкумян А.Р.1, Шиян О.В.1, Митичкин А.Е.1, Григорян И.Э.2, Иванников Н.Ю.1, Лисицына Е.С.3, Красовская О.Э.3

1 Государственное бюджетное учреждение здравоохранения г. Москвы "Городская клиническая больница имени Ф.И. Иноземцева Департамента здравоохранения г. Москвы", 105187, г. Москва, Российская Федерация

2 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный медико-стоматологический университет имени А.И. Евдокимова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 127473, г. Москва, Российская Федерация

3 Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственная фирма "Литех", 107023, г. Москва, Российская Федерация

Актуальность. Внутриутробное инфицирование новорожденных составляет 27-36% в структуре неонатальных заболеваний. Одной из ведущих этиологических причин внутриутробных инфекций является стрептококк группы B (СГВ), которым новорожденные в 60% случаев заражаются во время родов от инфицированной матери. Ретровагинальная колонизация СГВ во время беременности является фактором риска преждевременных родов и развития у новорожденных менингита, пневмоний, пиелонефрита. При этом запоздалая диагностика и, как следствие, нерациональное лечение часто приводят к дальнейшему распространению инфекции у новорожденного, вплоть до развития сепсиса. По данным мировой литературы, развитие СГВ-инфекции связано с заражением высоковирулентными клонами бактерии и среди них особое значение имеют клоны сиквенс-типов ST-1 и ST-17. Таким образом, одним из перспективных методов лабораторной диагностики является быстрый метод определения высоковирулентных клонов ST-1 и ST-17, который может быть применен для оценки риска развития неонатальных инфекций.

Цель исследования - изучение коллекции S. agalactiae с помощью фенотипических, биохимических и протеомных методов для типирования высоковирулентных клонов СГВ.

Материал и методы. Проведен масс-спектрометрический и кластерный анализ 36 штаммов S. agalactiae, выделенных у рожениц с преждевременными родами и преждевременным излитием околоплодных вод. В анализ включены результаты посева вагинально-ректальных мазков родильниц, полученные в родовом отделении. Идентификация S. Agalactiae, типирование и кластерный анализ штаммов проводили на анализаторе BactoSCREEN (ООО НПФ "Литех").

Результаты. У 6 (16,7%) штаммов был выявлен специфичный пик на 6250 Дa, характерный для высоковирулентных штаммов сиквенс-типа ST-1, у 14 (38,9%) штаммов выявлен специфичный пик на 7625 Дa, характерный для высоковирулентных штаммов сиквенс-типа ST-17. Наши результаты показывают, что 55,6% штаммов S. agalactiae, выделенных у рожениц с преждевременными родами и преждевременным излитием околоплодных вод (n=36) оказались клонами ST-1 и ST-17.

Заключение. Применение MALDI-TOF MS в скрининге СГВ позволяет обнаружить высоковирулентные штаммы СГВ, т.е. дает возможность прогнозировать высокий риск развития инфекций у новорожденных и рекомендовать обязательную санацию беременных и новорожденных, колонизированных данными штаммами стрептококка, для предотвращения развития ранних и поздних неонатальных инфекций.



Значение аутоантител в диагностике наружного генитального эндометриоза

Менжинская И.В., Мелкумян А.Р., Павлович С.В.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация

The value of autoantibodies in the diagnosis of external genital endometriosis

Irina V. Menzhinskaya, Alina R. Melkumyan, Stanislav V. Pavlovich

Kulakov Obstetrics, Gynecology and Perinatology National Medical Research Center of Ministry of Healthcare of the Russian Federation, 117997, Moscow, Russian Federation

Эндометриоз диагностируется у 10-15% женщин репродуктивного возраста и характеризуется наличием функциональных эндометриально-подобных желез и стромы вне полости матки, что может приводить к хронической тазовой боли, дисменорее, диспареунии и бесплодию, при этом значительно страдают здоровье и качество жизни женщин. "Золотым стандартом" диагностики наружного генитального эндометриоза (НГЭ) считается лапароскопия, которая позволяет визуализировать очаги эндометриоза и провести гистологическое исследование эктопической эндометриальной ткани. В настоящее время проводится поиск неинвазивных методов диагностики и прогнозирования течения эндометриоза. По результатам предшествующих исследований некоторые аутоантитела к специфическим эндометриальным антигенам (тропомиозину-3, тропомодулину-3), а также к синтаксину-5 и α-энолазе рассматриваются как перспективные маркеры для ранней диагностики эндометриоза.

Цель исследования - изучить спектр аутоантител у женщин c наружным генитальным эндометриозом и их диагностическое значение.

Материал и методы. Исследуемую группу составляли женщины с распространенным НГЭ III-IV стадии (n=39), контрольную группу - здоровые женщины без эндометриоза (n=26). Диагноз эндометриоза устанавливали согласно классификации Американского общества репродуктивной медицины (rASRM).

Иммунологические методы включали определение антифосфолипидных антител (M и G) к кардиолипину, β2-гликопротеину-1, фосфатидилсерину, аннексину V и IgG-антител к ламинину-1 с использованием иммуноферментных наборов (ORGENTEC Diagnostika, IBL International, Германия); антител к гормонам хорионическому гонадотропину человека (ХГЧ), прогестерону (ПГ) и эстрадиолу (Э) с помощью модификаций ИФА, описанных ранее; антител к тропомиозину-3 (ТМЗ), тропомодулину-3 (ТМД), синтаксину-5 (СТ) и α-энолазе-1 с применением модификаций ИФА с рекомбинантными протеинами (Abcam, Великобритания), иммобилизованными в концентрации 2-5 мкг/мл на микропланшетах MaxiSorp (Nunc, Дания).

Результаты. У женщин с эндометриозом выявлялся широкий спектр антител, часто обнаруживались антитела классов M и G к гормонам ХГЧ (35,9%), ПГ (30,8%) и Э (30,8%), а также к белковым антигенам ТМЗ (43,6%), ТМД (у 25,6%), СТ (35,9%) и α-энолазе (38,5%). Антифосфолипидные антитела выявлялись при эндометриозе реже - суммарно у 10,3% пациенток, антитела к ламинину-1 не найдены. Установлено, что у пациенток с НГЭ IgG-антитела к α-энолазе, ТМЗ и ХГЧ обнаруживались значимо чаще (у 33,3-38,5%), чем у здоровых женщин (у 3,85%; p<0,05), при этом риск наличия данных антител был выше в 11,5-15 раз (p<0,05). Средние уровни IgG-антител к α-энолазе, ТМЗ и ХГЧ у пациенток с эндометриозом был выше, чем у здоровых женщин (p<0,05). IgG-антитела к ТМЗ и α-энолазе имели высокую диагностическую значимость для эндометриоза (AUC 0,707 и 0,79; p<0,01). При определении комбинации данных антител диагностическая точность повышалась.

Таким образом, у пациенток с наружным генитальным эндометриозом выявляется широкий спектр аутоантител разной специфичности, включающий антитела к специфическим эндометриальным антигенам, стероидным и гонадотропным гормонам, при этом отмечается высокая вероятность наличия и диагностическая значимость IgG-антител к ТМЗ и а-энолазе. Предполагается, что данные биомаркеры могут быть значимыми для неинвазивной диагностики эндометриоза.



Российская модель электрофоретической камеры для селекции сперматозоидов и способ ее применения в программах ЭКО

Назаренко Р.В.1, Шнейдерман М.Г.1, Касаткин В.Э.2, Красный Д.В.3, Назаренко Т.А.1

1 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация

2 Институт физической химии и электрохимии РАН им. А.Н. Фрумкина, 119071, г. Москва, Российская Федерация

3 Научно-производственное предприятие "Эконикс", 119071, г. Москва, Российская Федерация

Актуальность. В настоящее время методы селекции сперматозоидов при экстракорпоральном оплодотворении ограничиваются центрифугированием эякулята в двойном градиенте плотности и процедурой swim-up (всплытие сперматозоидов). Такие технологии не дают возможность судить о функциональной зрелости сперматозоида и его внутренней структуре. Цель - в связи с этим существует необходимость разработки и внедрения новых методов селекции сперматозоидов в процедуре интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ).

Методы. Одним из таких методов является селекция сперматозоидов на основании исследования заряда его цитоплазматической мембраны.

Существующие альтернативные методы селекции сперматозоидов:

1. Связывание зрелых сперматозоидов с гиалуроновой кислотой.

2. Селекция сперматозоидов на основе выявления ранних маркеров апоптоза (магнитоактивированная клеточная сортировка).

3. Анализ морфологии сперматозоидов при сверхвысоком увеличении.

4. Поляризационная микроскопия.

5. Микрофлюидика ("лаборатория на чипе").

Однако вышеперечисленные методы не позволяют оценить все параметры морфологической и функциональной зрелости сперматозоидов. В связи с этим в ФГБУ "НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова" Минздрава России разрабатывается отечественный метод селекции сперматозоидов для процедуры ИКСИ на основании исследования заряда его цитоплазматической мембраны.

Метод основан на разделении сперматозоидов в камере для электрофореза. Камеру заполняют буфером для электрофореза и подают ток напряжением от 6 до 14 мА. Положительно заряженные сперматозоиды движутся к катоду, отрицательно заряженные - к аноду. Сперматозоиды, несущие на поверхности своей цитоплазматической мембраны отрицательный заряд, имеют высокую степень зрелости ядерного хроматина и низкий уровень фрагментации ДНК. Такие сперматозоиды предпочтительны для селекции в процедуре ИКСИ.

Результаты. Использование зрелых, отрицательно заряженных сперматозоидов увеличивает вероятность оплодотворения и снижает частоту прерывания беременности. С помощью иглы для микроинъекций сперматозоиды с отрицательным зарядом на мембране отбирают для ИКСИ.

Алгоритм использования электрофоретической камеры: камеру извлекают из стерильной упаковки и помещают на предметный стол стереомикроскопа, затем ее заполняют буфером для электрофореза. В качестве буфера используют растворы 10 мМ Tris и 20 мМ NaOH (pH 7,8). Затем в камеру вводят суспензию сперматозоидов, отмытых в двойном градиенте плотности по стандартному протоколу, и на электроды подают ток силой от 6 до 12 мА и напряжением от 15 до 65 В. Положительно заряженные сперматозоиды движутся к катоду, отрицательно заряженные - к аноду. С помощью иглы для микроинъекций сперматозоиды с отрицательным зарядом на мембране отбирают для ИКСИ.

Заключение. Разрабатываемая отечественная электрофоретическая камера имеет ряд конструктивных отличий от зарубежных аналогов и позволяет провести сепарацию сперматозоидов по всем параметрам их функциональной и морфологической зрелости.



Микробиологические исследования в диагностике внутриутробных инфекций новорожденных

Наумкина Е.В.1, Куклина Л.В.2

1 Бюджетное учреждение здравоохранения Омской области "Городской клинический перинатальный центр", 644007, г. Омск, Российская Федерация

2 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Омский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 644099, г. Омск, Российская Федерация

Актуальность. По данным статистики, при низком уровне младенческой смертности в РФ в последние годы уровень внутриутробных инфекций остается высоким и является одной из причин ранней неонатальной смертности.

Цель исследования - изучить информативность и диагностическую значимость микробиологического метода исследования для этиологической диагностики внутриутробного инфицирования (ВУИ) бактериальной природы.

Материал и методы. Проведен ретроспективный анализ результатов микробиологических исследований биоматериалов от родильниц и новорожденных в 72 случаях ранней неонатальной смертности при установленных диагнозах ВУИ за 20122019 гг., по материалам бактериологической лаборатории БУЗОО ГКПЦ. Результаты микробиологических обследований были доступны в 97% случаев, при этом обследование материалов как от женщины, так и от новорожденного параллельно проведено лишь в 47% случаев. Материалами для исследования от родильниц были отделяемое цервикального канала, плацента и околоплодные воды; от новорожденных - кожа подмышечной впадины, трахеобронхиальный смыв, кровь.

Результаты. Доля положительных высевов при исследовании отделяемого половых путей составила 60-90% при этом в 5-30% случаев в ассоциациях отмечался высев условно-патогенных микроорганизмов. При исследовании материала от новорожденных отмечалась высокая доля отрицательных результатов (>50%), при этом в большинстве положительных посевов рост возбудителей отмечался в низкой концентрации. Спектр выявляемых при рутинном обследовании бактериальных возбудителей выглядел сходным при исследовании материала от женщин и новорожденных и включал коагулазонегативные стафилококки, кишечную палочку и других представителей семейства энтеробактерий, стрептококки группы В, реже других групп, а также дрожжеподобные грибы рода Candida в монокультурах и ассоциациях. Однако полное или частичное совпадение видового состава возбудителей отмечалось не более чем в 30% случаев.

Заключение. Микробиологическое исследование материалов от родильницы и новорожденного - один из инструментов этиологической диагностики ВУИ бактериальной этиологии, однако его информативность в плане подтверждения возбудителя и его факта передачи от матери плоду/новорожденному не превышает 30%. Выявление условно-патогенных микроорганизмов, особенно в ассоциациях, и в высокой концентрации из половых путей родильниц даже при отрицательных результатах обследования новорожденных косвенно подтверждает наличие бактериальной ВУИ при наличии факторов риска/клинических признаков у новорожденного. Даже при высокой обсемененности половых путей родильницы, плаценты или околоплодных вод обследование материалов от новорожденного непосредственно после рождения зачастую не позволяет выявить возбудитель, вероятно, в силу низкой степени обсеменения на начальном этапе развития инфекционного процесса. Повышению диагностической ценности микробиологического исследования может способствовать увеличение кратности обследований, количества забираемых образцов, применение приемов, способствующих повышению чувствительности культурального исследования на этапе выполнения анализа, использование молекулярно-генетических методов, особенно при исследовании материалов от новорожденных.



Особенности развития системного воспалительного ответа и диагностика госпитальных инфекций у недоношенных новорожденных различного гестационного возраста

Никитина И.В.1, Крог-Йенсен О.А.1, 2, Герасимова А.В.2, Иванова Л.А.2, Дегтярев Д.Н.1, 2

1 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация

2 Федеральное автономное образовательное учреждение высшего образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет), 119991, г. Москва, Российская Федерация

Features of the development of a systemic inflammatory response and diagnosis of hospital infections in premature infants of different gestational age

I.V. Nikitina1, O.A. Krogh-Jensen1, 2, A.V. Gerasimova2, L.A. Ivanova2, D.N. Degtiarev1, 2

1 Kulakov Obstetrics, Gynecology and Perinatology National Medical Research Center of Ministry of НеаКИсаге of the Russian Federation, 117997, Moscow, Russian Federation

2 I.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University), 119991, Moscow, Russian Federation

E-mail: o_krogh@oparina4.ru

Актуальность. Наиболее частой причиной ухудшения клинического состояния новорожденных старше 72 ч жизни является развитие госпитальных инфекций (ГИ). Учитывая незрелость факторов иммунной защиты, колонизация условно-патогенной микрофлорой может привести к развитию у пациентов данной группы позднего неонатального сепсиса и в ряде случаев к летальному исходу. Манифестация инфекционного процесса у недоношенных новорожденных сопровождается повышением одного или нескольких маркеров воспаления. Однако темпы повышения маркеров в ряде случаев различаются. В связи с этим представляется актуальным понимание динамики изменения лабораторных маркеров синдрома системного воспалительного ответа (ССВО) у недоношенных новорожденных.

Цель исследования - изучить особенности динамики лабораторных маркеров ССВО при развитии ГИ у недоношенных новорожденных различного гестационного возраста, получающих лечение в отделении реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ).

Материал и методы. Проведен ретроспективный анализ 125 эпизодов ухудшения состояния 50 недоношенных новорожденных старше 72 ч жизни, ассоциированных с развитием ГИ. Все дети, включенные в исследование, были госпитализированы в ОРИТ "НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова" Минздрава России с января 2017 г. по декабрь 2018 г. Исходя из гестационного возраста новорожденные были разделены на 3 группы: 1-ю первую составили недоношенные новорожденные 25-28 нед (36 эпизодов ГИ у 12 детей), 2-ю - новорожденные 29-32 нед (77 эпизодов у 28 детей), 3-ю - дети >32 нед (12 эпизодов у 10 новорожденных).

Результаты. В ходе исследования проведено сравнение лабораторных показателей ССВО: повышение уровня С-реактивного белка (СРБ), прокальцитонина (ПКТ), лейкоцитоз, лейкопения, нейтрофилез, нейтропения, повышение нейтрофильного индекса (НИ), тромбоцитопения, которые контролировали при ухудшении клинического состояния у детей данных групп. Повышение уровня ПКТ наблюдалось значительно чаще, чем повышение СРБ, во всех группах пациентов (65,7 vs 19,4% в 1-й группе; 47,3 vs 15,3% во 2-й группе и 41,7 vs 25% в 3-й группе). Лейкоцитоз >20х109/л не встречался у новорожденных >32 нед и чаще отмечался у детей 25-28 нед гестации по сравнению с группой 29-32 нед (38,8 vs 25,3%). НИ чаще повышался в 1-й группе детей по сравнению со 2-й и 3-й группами (19,4 vs 5,3 vs 0%). Частота тромбоцитопении была выше в группах 25-28 и 29-32 нед по сравнению с детьми, чей гестационный возраст был >32 нед (30,6 и 22,7 vs 8,3%).

Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о том, что у новорожденных ≤28 нед отмечались наибольшая частота эпизодов клинического ухудшения состояния, ассоциированных с развитием ГИ, и максимально выраженные изменения лабораторных маркеров ССВО. У новорожденных >32 нед лабораторные отклонения были выражены в меньшей степени, поэтому у данной группы детей при подозрении на развитие ГИ наряду с изменением маркеров ССВО следует обращать пристальное внимание на изменения в клиническом состоянии. Все полученные данные при обследовании недоношенных детей необходимо анализировать в совокупности.



Особенности микробиологического пейзажа недоношенных новорожденных с течением госпитальных инфекций, получающих лечение в условиях отделения реанимации и интенсивной терапии

Никитина И.В.1, Крог-Йенсен О.А.1, 2, Исаева Е.Л.1, Герасимова А.В.2, Иванова Л.А.2, Ленюшкина А.А.1, Дегтярев Д.Н.1, 2

1 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация

2 Федеральное автономное образовательное учреждение высшего образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет), 119991, г. Москва, Российская Федерация

Features of the microbiological landscape of premature infants with hospital infections receiving treatment in ICU

I.V. Nikitina, O.A. Krogh-Jensen, E.L Isaeva, A.V. Gerasimova, L.A., Ivanova A.A. Lenushkina, D.N. Degtyarev

1 Kulakov Obstetrics, Gynecology and Perinatology National Medical Research Center of Ministry of Неаlthcare of the Russian Federation, 117997, Moscow, Russian Federation

2 I.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University), 119991, Moscow, Russian Federation

E-mail: olgaborisevich@gmail.com

Актуальность. Совершенствование методов выхаживания недоношенных новорожденных увеличило показатели выживаемости среди данной категории детей. Вместе с тем несовершенство факторов иммунной защиты, связанное с морфофункциональной незрелостью новорожденных, создает предпосылки для реализации госпитальных инфекций (ГИ) при колонизации слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) условно-патогенными микроорганизмами в условиях стационара. Это является наиболее частой причиной развития ГИ у недоношенных детей в возрасте старше 72 ч жизни.

Цель исследования - изучить особенности микробиологического пейзажа слизистых оболочек ЖКТ недоношенных новорожденных, получающих лечение в условиях ОРИТ.

Материал и методы. Проведен анализ микрофлоры отделяемого зева, кала и посевов крови на стерильность при 125 эпизодах клинического ухудшения состояния, связанных с развитием ГИ, у 50 недоношенных новорожденных в возрасте старше 72 ч жизни. Все дети были госпитализированы для обследования и лечения в ОРИТ ФГБУ "НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова" Минздрава России с января 2017 г. по декабрь 2018 г. Исходя из гестационного возраста (ГВ) пациенты были разделены на 3 группы: 25-28 нед (36 эпизодов ухудшения состояния у 12 детей); 29-32 нед (77 эпизодов у 28 детей); >32 нед (12 эпизодов у 10 детей). Во всех наблюдениях проведен ретроспективный анализ материнской и неонатальной документации.

Результаты. Особое внимание обращали на особенности микробиологической картины в период ухудшения состояния у детей исследуемых групп. Положительная гемокультура была получена значительно в большем числе случаев у пациентов 1-й группы (13,8 vs 9,2 vs 9,1%). В 8 случаях (2 случая у пациентов из 1-й группы, 5 случаев у пациентов из 2-й группы и 1 случай у новорожденного из 3-й группы) развитие ГИ с высокой вероятностью было связано с транслокацией возбудителя из ЖКТ в кровь и развитием бактериемии, что было подтверждено определением одного и того же возбудителя в различных образцах биоматериала. Положительный результат микробиологических посевов отделяемого из зева и ануса также чаще отмечался у детей 1-й группы (80,6 vs 63,4 vs 72,7% и 80,6 vs 65,3 vs 63,6% соответственно). Микробиологический пейзаж был представлен преимущественно грамположительными кокками у недоношенных новорожденных всех трех групп (52,4; 56,3 и 55,6% от всех обнаруженных микроорганизмов соответственно) с превалированием коагулазонегативных стафилококков. Грамотрицательная микрофлора составила 28,1% в 1-й группе, 23,6% во 2-й и 44,4% в 3-й группе и была представлена различными возбудителями семейства Enterobacteriaceae с преобладанием Klebsiella pneumoniae во всех группах детей. Выделение грибковой микрофлоры отмечалось только у новорожденных 1-й и 2-й групп практически в одинаковом соотношении (19,5 и 20,1%) и во всех случаях был представлен грибами вида Malassezia furfur.

Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о том, что при реализации ГИ среди условно-патогенной микрофлоры у недоношенных детей превалируют грамположительные коагулазонегативные стафилококки. Грамотрицательная флора с преобладанием Klebsiella pneumoniae была выявлена в качестве возможного причинного возбудителя ГИ у 28,1% новорожденных ГВ ≤28 нед, 23,6% у детей ГВ 29-32 нед и у 44,4% ГВ >32 нед. Грибковая микрофлора, представленная грибами вида Malassezia furfur, обнаружена только у новорожденных ГВ <32 нед в 20% от общего числа выявленных микроорганизмов.



Связь активации системы гемостаза с развитием преэклампсии

Николаева М.Г., Момот А.П., Щеклеина К.В., Корчагина А.В., Терехина В.Ю.

Алтайский филиал ФГБУ НМИЦ гематологии Минздрава России, 656044, г. Барнаул, Российская Федерация;

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 656038, г. Барнаул, Российская Федерация

Correlation between activation of hemostatic system and development of pre-eclampsya

M.G. Nikolaeva, А.P. Momot, K.V. Shchekleina, A.V. Korchagina, V.Yu. Terehina

Altai Branch of the Scientific Medical Center of Hematology, Ministry of Healthcare of Russia, 656044 Barnaul, Russian Federation; Altai State Medical University, Ministry of Healtlcare of the Russian Federation, 656038, Barnaul, Russian Federation

E-mail: nikolmg@yandex.ru

Актуальность. Согласно современным представлениям, вклад нарушений в системе гемостаза определяет 15-25% случаев развития преэклампсии (ПЭ). При этом ключевая роль принадлежит активации системы гемостаза, коррекция которой может способствовать улучшению акушерских и перинатальных исходов.

Цель исследования - определить особенности активации системы гемостаза при развитии преэклампсии.

Материал и методы. Проведено проспективное когортное исследование с участием 109 беременных. Основную группу составили 59 пациенток, беременность которых осложнилась развитием умеренной или тяжелой ПЭ, контрольную - 50 женщин с благоприятным течением беременности. Критерии включения: возраст 18-45 лет; информированное согласие на проведение дополнительных методов исследования. Критерии исключения: многоплодная беременность, экстрагенитальные заболевания в стадии декомпенсации, антифосфолипидный синдром. Статистическую обработку данных проводили с использованием пакета статистического программного обеспечения MedCalcVersion 17.9.7 (лицензия BU556-P12YT-BBS55-YAH5M-UBE51)

Результаты. Клинико-анамнестический анализ показал, что пациентки основной группы значимо чаще страдали хронической гипертензией (OR 2,3; р=0,0043), избыточной массой тела (OR 1,7; р=0,001) и хроническими заболеваниями почек (OR 2,2; р=0,0054), что сопоставимо с данными метаанализов, проведенных ранее.

Исследование отдельных параметров системы гемостаза показало, что за 2-3 дня до развития клинической картины ПЭ отмечается достоверно значимое повышение уровня D-димеров: в основной группе медиана показателя определена как 570 [95% доверительный интервал (ДИ) 400-655] vs 365 (95% ДИ 309-410) нг/мл в контрольной группе (р=0,0035). При исследовании уровня тканевого фактора (TF) и его ингибитора (TFIP) определено, что в эти же сроки уровень TF увеличивается в 8 раз: 54,4 (95% ДИ 51,1-60,7) vs 7,5 (95% ДИ 4,5-8,5) пмоль/мл в группе контроля (р<0,0001). Отношение уровня тканевого фактора к его ингибитору (TF/TFIP) возрастало в 13 раз: 41,0 (95% ДИ 35,5-46,7) vs 3,2 (95% ДИ 2,8-4,6) (р<0,0001). Также для женщин, беременность которых осложнилась развитием ПЭ, характерно снижение активности физиологического антикоагулянта антитромбина III (AT III). Медиана активности АТ III составила 96,5% (95% ДИ 79,48-113,15) в случае развития ПЭ и 107% (95% ДИ 88,6-124,0) при физиологическом течении беременности (р=0,0015). По данным интегрального теста тромбографии установлено, что развитие ПЭ сопровождается усилением тромбинообразования с 18-й недели гестации. За 2-3 дня до развития клинической картины ПЭ медианы показателя Peak thrombin достигали достоверных отличий: 2530 (95% ДИ 2324-2678) нмоль/мл в основной группе против 1735 (95% ДИ 1619-1960) нмоль/мл (р<0,0001) в группе контроля.

Заключение. Проанализированные в работе лабораторные параметры являются объективными предикторами развития ПЭ, что позволяет рассматривать активацию системы гемостаза в качестве обоснованной предпосылки для проведения гепаринопрофилактики.



Активность протромбина при носительстве мутации F2G20210A, связанная с гестационными осложнениями

Николаева М.Г., Момот А.П., Ясафова Н.Н., Тараненко И.А.

Алтайский филиал Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр гематологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 656044, г. Барнаул, Российская Федерация

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 656038, г. Барнаул, Российская Федерация

Prothrombin activity in F2G20210A mutation carriers related to gestational complications

M.G. Nikolaeva, A.P. Momot, N.N. Yasafova, I.A. Taranenko

Altai Branch of the Scientific Medical Center of Hematology, Ministry of Healthcare of Russia, 656044 Barnaul, Russian Federation; Altai State Medical University, Ministry of Healtlcare of the Russian Federation, 656038, Barnaul, Russian Federation

E-mail: nikolmg@yandex.ru

Актуальность. В настоящее время имеется хорошая доказательная база об ассоциации носительства мутации гена протромбина (F2G20210A) с риском развития тромбозов, реализация которых обусловлена в том числе повышением активности фактора II (протромбина) в плазме крови. Влияние мутации F2G20210A на риск развития гестационных осложнений - вопрос спорный, а избыточная активность протромбина в данной когорте как фактор риска не рассматривается.

Цель исследования - изучить связь активности протромбина в плазме крови при носительстве мутации F2G20210A с развитием гестационных осложнений.

Материал и методы. С 2012 по 2018 г. проведено проспективное клиническое когортное исследование 290 беременных в возрасте 18-45 лет. Выделено 2 когорты: основная группа - 140 пациенток с генотипом F2G20210A и группа контроля -150 женщин, нормозиготных в отношении изучаемой мутации, генотип F2G20210G. В группах определена активность протромбина (фактора II) в плазме венозной крови в сроки беременности, учитывающие волны инвазии цитотрофобласта, проведен ассоциативный анализ с осложнениями гестации.

Результаты. Установлено, что медиана показателя активности протромбина при физиологическом течении беременности у пациенток группы контроля колебалась от 108% (в прегравидарном периоде) до 144% (во время беременности) [95% доверительный интервал (ДИ) 130-150]. У пациенток основной группы, генотип F2G21210A, данный показатель был значимо выше в аналогичные периоды, от 149 до 181% (95% ДИ 142-195; p<0,0001). У 103 (73,6% от 140) пациенток основной группы активность протромбина во временных точках исследования определена в диапазоне от 148,5 до 180,6%, что ассоциировалось с благоприятным течением и исходом беременности. В 8 эпизодах (5,7% от 140) беременность закончилась гибелью плодного яйца в сроке гестации 8-9 нед, при этом медиана активности протромбина составила 198,1% (95% ДИ 191,5-201,4), что значимо больше, чем аналогичный показатель, определенный в сроке 8 нед при продолжении беременности, - 176,3% (95% ДИ 142,2-180,1; р=0,0069). При прогрессировании гестации и развитии задержки роста плода (ЗРП) активность протромбина повышалась в 22 нед, достигая максимума к 28 нед (медиана - 204,0%). Наиболее значимые результаты получены при анализе лабораторного фенотипа при развитии тяжелой преэклампсии (ПЭ). Показатель активности протромбина в данной когорте был достоверно выше, чем при благоприятном течении беременности начиная с предгравидарного этапа, варьируя от 180,0 до 201,0%. Рассчитано пороговое значение активности фактора II при мутации F2G20210A, позволяющее прогнозировать развитие ПЭ, проводя исследования как на предгравидарном этапе (171,0%; AUC - 0,86; p<0,0001), так и в сроке гестации 7-8 нед (181,3%; AUC - 0,84; p<0,0001).

Заключение. Полученные данные по активности протромбина в плазме крови, сопоставленные с клиническими проявлениями в виде осложнений беременности, позволяют предположить, что реализация генотипа F2G20210A в виде ранней и/или тяжелой ПЭ и ЗРП ассоциирована и определяется уровнем активности данного фактора свертывания крови.



Морфологические особенности головного мозга у новорожденных с поствоспалительной гидроцефалией

Проценко Е.В.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 153045, г. Иваново, Российская Федерация

Morphological features of the brain in newborns with post-inflammatory hydrocephalus

Elena V. Protsenko

Federal State Budget Institute Ivanovo Scientific-Research Institute named after V.N. Gorodkov, 153045, Ivanovo, Russian Federation

E-mail: procenko_e_v@mail.ru

Актуальность. Структура человеческого мозга в пренатальном онтогенезе определяется дифференцировкой неокортекса и ремоделированием перивентрикулярной герминативной зоны (Алиханов А.А., 2004; Проценко Е.В., 2014). Гестационные преобразования мозга при патологии перинатального периода, включая гидроцефалию, изучены мало (Gonzalez-Perez О., 2012). Цель исследования - выявить морфологические особенности неокортекса и герминативного матрикса у новорожденных с поствоспалительной гидроцефалией.

Материал и методы. Проведено комплексное морфологическое исследование 11 объектов головного мозга умерших новорожденных гестационного возраста 22-40 нед с дилатацией боковых желудочков >1,5 см (ультразвуковой критерий гидроцефалии; Зубарева Е.А., 2004), истончением мозговой паренхимы и положительными результатами иммуногистохимической идентификации антигенов вируса простого герпеса 2 (ВПГ2), цитомегаловируса (ЦМВ) либо вируса Эпштейна-Барр в ее структурных компонентах. Контрольную группу составили новорожденные (30) с шириной боковых желудочков ≤0,5 см. Ткань неокортекса и герминативного матрикса (ГМ), иссеченную в проекции прецентральной извилины (корковое представительство двигательного анализатора), исследовали на гистологических срезах толщиной 4 мкм, окрашенных по методу Ниссля. Функциональную активность кортикогенеза и ремоделирования ГМ оценивали методами иммуногистохимической идентификации рилина в клетках молекулярного (I) слоя коры и ММР9 в глиобластах перивентрикулярной зоны. Материал в зависимости от гестационного возраста новорожденных разделили на подгруппы: 22-27, 28-32, 33-37 и 38-40 нед. Статистическую обработку результатов проводили с учетом среднеарифметической ошибки средней и U-критерия Манна-Уитни. Значимыми считали различия между средними показателями p<0,05.

Результаты. В головном мозге новорожденных при поствоспалительной гидроцефалии, сопряженной с герпесвирусной инфекцией, в разные сроки гестации наблюдается слабая экспрессия рилина в нейронах Кахаля-Ретциуса (p=0,025) в сочетании с замедлением темпа дифференцировки моторной коры. Последнее проявляется отсутствием камбиальной зоны и клеточным обеднением молекулярного (I) слоя, укорочением нейронных модулей наружного зернистого (II) слоя и отсутствием дифференцировки пирамидного (III) слоя до 33-й недели гестации. В неокортексе встречаются дистрофические и деструктивные изменения нейронов, клетки-тени и очаговые клеточные опустошения. Субкортикальный глиоз маскирует границу между серым и белым веществом. Особенности экспрессии ММР9 в глиобластах в виде временного компенсаторного повышения на 22-27-й неделях (p=0,014) и снижения в дальнейшем (p=0,036) обусловливает раннее начало, но замедленный темп редукции герминативного матрикса.

Заключение. Морфологические особенности мозга новорожденных с поствоспалительной гидроцефалией - субкортикальный глиоз, деструктивные изменения нейронов, а также замедление темпов редукции ГМ и дифференцировки неокортекса в проекции прецентральной извилины.



Патоморфология плодных оболочек при их преждевременном разрыве

Сарыева О.П., Вахромеев А.П., Парейшвили В.В.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ивановский научно исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 153045, г. Иваново, Российская Федерация

Pathomorphology of fetal membranes in their premature rupture

O.P. Saryeva, A.P. Vakhromeev, V.V. Pareishvili

Federal State Budget Institute Ivanovo Scientific-Research Institute named after V.N. Gorodkov, 153045, Ivanovo, Russian Federation

E-mail: saryevaolga@mail.ru

Особая актуальность проблемы преждевременного разрыва плодных оболочек (ПРПО) в акушерской практике определяется высокой частотой встречаемости. Роды, осложненные ПРПО, при недоношенной беременности, по разным данным, составляют от 5 до 35% и не имеют тенденции к снижению (Князева Т.П., 2016). Согласно статистическим данным, до 51% преждевременных родов инициированы ПРПО (Артымук Н.В., Елизарова Н.Н., 2016). Одним из факторов, способствующих реализации ПРПО и преждевременных родов, является недифференцированная дисплазия соединительной ткани (нДСТ). Настоящее исследование проведено с целью изучения морфологических особенностей плодных оболочек последов при их преждевременном разрыве у женщин с нДСТ. Комплексное морфологическое исследование оболочек включало визуальный осмотр, обзорную гистологию и иммуногистохимическое исследование с антителами к MMP-9. Всего исследованы оболочки 65 последов: 22 составили 1-ю основную группу (с ПРПО без нДСТ); 13 - 2-ю основную группу (с ПРПО и нДСТ); 22 - группу сравнения (с нДСТ без ПРПО) и 10 - группу контроля (соматически здоровые женщины).

В 1-й основной группе париетальный децидуит отмечен в 81,8% случаев, что достоверно превышает показатели групп контроля и сравнения, но не имеет статистических отличий от 2-й группы. Частота встречаемости восходящей инфекции с развитием париетального хориоамнионита (68,2%) была достоверно выше показателей других групп. Гистологически в оболочках отмечена очаговая пролиферация амниотического эпителия и смешанноклеточная лимфолейкоцитарная инфильтрация в области децидуального и цитотрофобластического слоев. Уровень экспрессии ММР-9 достоверно выше значений группы контроля (p=0,0004), но меньше показателей 2-й основной группы (p=0,001).

При гистологическом исследовании оболочек последов 2-й основной группы (с ПРПО и нДСТ) париетальный децидуит диагностирован в 65% случаев, что статистически сопоставимо с показателями 1-й группы. В большинстве случаев имели место субамниальный отек, частичная десквамация и уплощение амниотического эпителия, а также очаговый склероз и отек компактного слоя. В зоне разрыва оболочек отмечены участки гипоплазии компактного вещества, гиалиноз и прослойки фибриноида. Уровень экспрессии MMP-9 в структурах внеплацентарных оболочек был существенно выше, чем в группах контроля и сравнения, что, вероятно, обусловлено проявлением дезорганизации соединительной ткани в сочетании с воспалением.

В оболочках группы сравнения (с нДСТ без ПРПО) частота париетального децидуита не имела достоверных отличий от группы контроля и была достоверно ниже показателей основных групп. Компактный слой визуализировался отечным, разволокненным, с уменьшением количества фибробластов. Экспрессия ММР-9 была достоверно выше группы контроля и 1-й основной группы, но статистически меньше показателей 2-й группы.

Таким образом, структурные изменения плодных оболочек при их преждевременном разрыве в сочетании нДСТ и без нее, а также увеличение местной экспрессии ММР-9, ответственной за ремоделирование экстрацеллюлярного матрикса, позволяют считать, что причина ПРПО связана не только с воспалением в оболочках, но и с дисплазией соединительной ткани. Последнюю можно рассматривать как один из предикторов ПРПО.



Влияние массы тела новорожденного на фармакокинетические свойства ванкомицина

Сердюкова Д.М.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация

E-mail: d_serdyukova@oparina4.ru

Актуальность. Несмотря на развитие клинической лабораторной диагностики, достаточно остро стоит проблема дозирования лекарственных препаратов. Особую актуальность в отсутствии адекватной доказательной базы она приобрела в терапии новорожденных.

Цель - изучить фармакокинетические особенности метаболизма ванкомицина у новорожденных с учетом массы тела. Материал и методы. В ходе выполненной работы было проведено 165 фармакокинетических исследований на определение остаточной концентрации ванкомицина с участием 41 новорожденного. Среди них 95,8% - недоношенные [с экстремально низкой массой тела (ЭНМТ) - 62,5%; с очень низкой массой тела (ОНМТ) - 33,3%]; оставшиеся 4,2% пациентов - доношенные новорожденные. У детей брались образцы нативной венозной крови объемом 0,5 мл.

Результаты. В ходе исследования удалось выявить несколько закономерностей. У недоношенных новорожденных более половины значений остаточной сывороточной концентрации ванкомицина было выше нормы, <15 мг/л (в 50% случаев - у детей с ОНМТ, в 51,3% - с ЭНМТ). Однако и нормальные значения (10-15 мг/л) препарата в плазме для достижения терапевтического эффекта также наблюдались в группе у недоношенных (31,9% - у детей с ЭНМТ, 25% - у детей с ОНМТ), тогда как у доношенных новорожденных реже всего достигались нормальные значения сывороточной концентрации препарата - в 6,7% случаев. Кроме того, у них чаще не достигалась нормальная терапевтическая концентрация антибиотика - в 53,3% случаев.

Заключение. У преобладающего большинства недоношенных детей (более 50%) остаточная концентрация ванкомицина на момент следующей инъекции была выше нормы, обеспечивающей клинический эффект (10-15 мг/л). Благодаря NeoFax и фармакокинетическим исследованиям уже актуализирован режим дозирования гентамицина, имеющего выраженный токсический эффект при высокой остаточной концентрации в плазме. Ванкомицин, как и аминогликозид, обладает почечным клиренсом и нуждается в постоянном мониторировании и коррекции дозы. Наше исследование позволяет предположить, что при соблюдении стандартного режима дозирования ванкомицина у недоношенных новорожденных высок риск токсических эффектов, а соответственно следует рассмотреть удлинение интервала введения ванкомицина по аналогии с гентамицином у недоношенных новорожденных.



Остаточная концентрация ванкомицина в крови у новорожденных с различной массой тела

Сердюкова Д.М., Любасовская Л.А., Шабанова Н.Е., Припутневич Т.В.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация

Актуальность. Известно, что фармакокинетика лекарственных средств у недоношенных новорожденных значительно отличается от таковой в клинических исследованиях на взрослых добровольцах. В связи с этим в неонатологии достаточно остро стоит проблема дозирования лекарственных препаратов. Для некоторых лекарственных средств, например для ванкомицина, в NeoFax прописано увеличение интервала дозирования до 18 ч, для гентамицина - до 36 ч в зависимости от гестационного возраста и массы тела новорожденных.

Цель - изучить остаточные концентрации ванкомицина в крови у новорожденных с различной массой тела.

Материал и методы. В ходе выполненной работы проведено 192 проб остаточной концентрации ванкомицина в сыворотке крови у 41 новорожденного. Среди них 95,8% - недоношенные дети, из них с экстремально низкой массой тела (ЭНМТ) - 62,5%; с очень низкой массой тела (ОНМТ) - 33,3%; 4,2% - доношенные новорожденные. У детей брали образцы нативной венозной крови объемом 0,5 мл. Исследование сыворотки крови проводили с использованием коммерческих наборов на Architect c8000 analyzer. При анализе пробы крови от новорожденных разделили на 3 группы: I - менее 1500 г (n=113), II - 1501-2500 г (n=64), III - более 2500 г (n=15).

Результаты. В ходе исследования удалось выявить несколько закономерностей. У недоношенных новорожденных I и II группы более 50% значений остаточной сывороточной концентрации ванкомицина оказались выше нормы (более 150 мг/л) - в 50% случаев в пробах от детей I группы и в 51,3% - II группы. Нормальные значения (10-15 мг/л) препарата в сыворотке для достижения терапевтического эффекта в I группе обнаружили в 31,9% проб, во II группе - в 25% проб. Группа доношенных новорожденных представлена небольшой выборкой, поэтому на данном этапе работы полученные данные могут оказаться недостоверными. Так, в группе доношенных (III группа) реже всего достигались нормальные значения сывороточной концентрации ванкомицина - в 6,7% случаев, чаще всего концентрация антибиотика оказывалась ниже терапевтической - в 53,3% случаев.

Заключение. У преобладающего большинства недоношенных детей (более 50%) остаточная концентрация ванкомицина на момент следующей инъекции была выше нормы, обеспечивающей клинический эффект (10-15 мг/л). Благодаря NeoFax и фармакокинетическим исследованиям уже актуализирован режим дозирования гентамицина, имеющего выраженный токсический эффект при высокой остаточной концентрации в плазме. Ванкомицин, так же как и аминогликозид, обладает почечным клиренсом и нуждается в постоянном мониторировании и коррекции дозы. Наше исследование позволяет предположить, что при соблюдении стандартного режима дозирования ванкомицина у недоношенных новорожденных высок риск токсических эффектов, а соответственно, следует рассмотреть удлинение интервала введения ванкомицина по аналогии с гентамицином у недоношенных новорожденных.

Работа выполнена в рамках соглашения № 05.604.21.0241 "Разработка технологии персонализированного лечения матерей и новорожденных с инфекционно-воспалительными заболеваниями, вызванными мультирезистентными штаммами микроорганизмов, на основании генотипирования возбудителей и терапевтического лекарственного мониторинга антимикробных препаратов" (мероприятие 1,2, очередь 1) Министерства науки и высшего образования РФ. Программа: "Исследование и разработка по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014-2020 годы".



Предикция рецидива миомы матки на основе липидомного анализа тканей миометрия и миоматозных узлов

Тоноян Н.М., Козаченко И.Ф., Адамян Л.В., Франкевич В.Е., Чаговец В.В., Токарева А.О., Стародубцева Н.Л.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация

Prediction of myomas recurrence using lipid analysis of myometrial tissues and fibroids

Цель исследования - прогнозирование рецидива миомы матки методом прямой масс-спектрометрии.

Материал и методы. Липидомный анализ образцов тканей миометрия и миоматозных узлов проведен у 66 пациенток, которым было выполнено органосохраняющее лечение (миомэктомия лапароскопическим доступом) на базе ФГБУ "НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова" Минздрава России: 35 пациенток с впервые диагностированной миомой матки (ММ), 31 - с рецидивом миомы матки (РММ). Качественную и количественную оценку липидома проводили с помощью масс-спектрометрии с электрораспылением. Полуколичественную оценку уровней липидов выполняли методом прямой масс-спектрометрии.

Результаты. Представленные группы пациентов отличались по липидному составу тканей миоматозных узлов, уровню содержания сфинголипидов, фосфолипидов, триглицеридов и жирных кислот. Для миомы и миометрия характерно изменение уровня липидов, относящихся к метаболизму глицерофосфолипидов и сфинголипидов. В тканях миомы изменен метаболизм линолевой кислоты. В тканях миометрия различий по группам не выявлено, что может подтверждать теорию развития миомы матки из одной-единственной гладкомышечной клетки. В тканях миометрия и в случае впервые выявленного заболевания, и в случае РММ происходят одни и те же молекулярные механизмы, приводящие к развитию миоматозных узлов.

Заключение. Сравнение масс-спектрометрических профилей группы образцов позволяет выявлять воспроизводимые отличия между этими группами. Сравнительное изучение масс-спектрометрических профилей тканей миоматозных узлов и миометрия позволит выявить новые молекулярные маркеры для диагностики и прогнозирования течения заболевания. Проблема поиска маркеров социально-значимых заболеваний относится к приоритетным направлениям развития биомедицинской науки, поскольку маркеры позволяют не только детализировать молекулярные механизмы развития патологических процессов, но и разработать алгоритмы для их диагностики и контроля лечения.



Способ прогнозирования степени риска нарушения микробиоты влагалища

Хурасева А.Б., Реминная Т.В.

Федеральное автономное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 305041, г. Курск, Российская Федерация

Method for prediction the risk of vaginal microbiota disturbance

Anna B. Khuraseva, Tatyana V. Reminnaya

Kursk State Medical University, 305041, Kursk, Russian Federation

E-mail: kololoka@yandex.ru

Актуальность заявляемого способа прогнозирования риска заключается в том, что главная задача врача акушера-гинеколога - активное и своевременное выявление предикторов нарушений микробиоты влагалища.

Цель работы - создать способ прогнозирования степени риска нарушения микробиоты влагалища на основании простых, легко выполнимых критериев. Зачастую диагноз нарушения микробиоты влагалища ставится врачом интуитивно, основываясь на жалобах самих пациенток, данных объективного осмотра и результатов мазка на флору. Лечение также назначается без учета изменений микробиоценоза.

Материал и методы. При разработке предлагаемого метода обследованы женщины репродуктивного возраста, обратившиеся на прием к врачу гинекологу НУЗ "Дорожная клиническая больница на станции Воронеж-1" ОАО РЖД г. Воронежа. В обследование включены женщины 18-35 лет с жалобами на обильные гомогенные выделения из половых путей.

В прогнозе нарушений микробиоценоза влагалища используют следующие показатели.

1. Анамнестические признаки:

- жалобы на обильные выделения (1 балл);

- инфекционно-воспалительные заболевания полового тракта (2 балла);

- инфекции мочевыводящих путей (2 балла);

- заболевания желудочно-кишечного тракта (2 балла);

- количество половых партнеров: >1 (1 балл), >2 (2 балла);

- использование антибактериальных препаратов (1 балл);

- наличие сопутствующих экстрагенитальных заболеваний (1 балл).

2. Клинические признаки:

- объективно изменение вагинальных выделений (2 балла);

- нарушение менструального цикла (1 балл);

- положительная аминная проба с КОН (2 балла);

- повышение уровня рН >4,5 (5 баллов).

3. Лабораторные признаки:

- наличие ключевых клеток в мазках на флору (3 балла);

- результаты анализа Фемофлор 16 с изменением биоценоза по типу анаэробного дисбиоза, аэробного дисбиоза, смешанного дисбиоза (7 баллов);

- результаты бактериологического исследования с выявлением превалирующей патологической микрофлоры (7 балла);

- наличие бактерий в общем анализе мочи (3 балла);

- обнаружение патогенной микрофлоры в бактериологическом исследовании мочи (3 балла).

При сборе анамнеза и обследовании пациенток оцениваются вышеперечисленные признаки, которым присваивают баллы от 0 до 7 и подсчитывают сумму баллов. Максимальное количество баллов - 45, что свидетельствует о 100% нарушении микробиоты влагалища.

Сумма 1-15 - низкая степень риска.

Сумма 16-30 - средняя степень риска.

Сумма 31-45 - высокая степень риска.

Результат изобретения - повышение эффективности раннего прогнозирования нарушения микробиоты влагалища.

Заключение. Созданный способ прогнозирования степени риска нарушения микробиоты влагалища на основании простых критериев позволяет дать оценку существующей микробиоте влагалища и прогнозировать возможные изменения микробиоценоза, требующие терапевтической коррекции.



Экспресс-диагностика степени неопластической трансформации шейки матки по молекулярному профилю ткани методом масс-спектрометрии

Чаговец В.В.1, Стародубцева НА1, 2, Токарева А.О.1, 2, Некрасова М.Е.1, Кононихин А.С.1, 2, Назарова Н.М.1, Франкевич В.Е.1

1 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация

2 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Московский физико-технический институт (национальный исследовательский университет)", 141701, Московская область, г. Долгопрудный, Российская Федерация

Неопластическая трансформация цервикального эпителия значительно меняет уровень метаболизма в пораженных клетках.

Цель данной работы - дифференцировать стадии трансформации эпителия шейки матки, связанные с вирусом папилломы человека (ВПЧ), с использованием масс-спектрометрического анализа липидного профиля тканей шейки матки.

Образцы тканей от 75 ВПЧ-позитивных женщин с цервицитом (n=20), LSIL (n=20), HSIL (n=20) и раком шейки матки (n=15) были взяты для гистологического и масс-спектрометрического исследования. Липидом эпителиальной ткани шейки матки изучали с помощью полуколичественной масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением. Полученные масс-спектрометрические данные подвергали дискриминантному анализу с ортогональной проекцией на скрытые структуры (OPLS-DA).

OPLS-DA анализ липидомных данных позволил разработать статистические модели, дифференцирующие доброкачественные, предраковые и злокачественные процессы в шейке матки. Были определены потенциальные диагностические маркеры ранней дифференцировки HSIL и рака шейки матки, представленные фосфатидилхолинами, фосфатидилэтаноламинами и плазмалогенами. Ранее отклонения уровней этих липидов уже связывали с опухолевыми процессами и канцерогенезом других локализаций.

Был предложен диагностический и потенциально прогностический метод быстрого определения стадии ВПЧ-ассоциированной трансформации шейки матки.

Работа выполнена в рамках гранта РНФ № 18-75-10097.



Анализ отдельных компонентов системы гемостаза в до- и послеродовом периодах у женщин, родоразрешенных путем кесарева сечения

Шпилюк М.А., Безнощенко О.С., Кречетова Л.В., Шмаков Р.Г., Иванец Т.Ю.

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация

Во время беременности увеличивается коагуляционный потенциал крови с пиком активности свертывания в послеродовом периоде, особенно после оперативного родоразрешения. Цель исследования - оценка изменений активности прокоагулянтов и антикоагулянтов в до- и послеродовом периодах после кесарева сечения.

Материал и методы. В исследование были включены 53 беременных (возраст 21-45 лет, медиана - 32 года), родоразрешенные путем кесарева сечения. Взятие крови на анализ гемостаза у женщин проводили 4 раза: точка 1 - непосредственно до кесарева сечения (до любых манипуляций с пациенткой); точка 2 - через 3-5 ч после операции; точка 3 - на 2-е сутки после операции; точка 4 - на 4-е сутки после операции. В работе оценивали активность антитромбина, протеина С, фактора VIII, фактора Виллебранда концентрации фибриногена по Клаусу и D-димера. Все исследования проводили на автоматическом коагулометре SYSMEX CA-1500 (Япония).

Результаты и обсуждение. Активность антитромбина после кесарева сечения снижалась с пиком падения в точке 3 (перед операцией - 114,1±11,5%, через 2 сут - 86,8±12,6%, p<0,0001), что свидетельствует о снижении антикоагуляционного потенциала крови. Активность протеина С, напротив, на всем протяжении наблюдений значимо росла (перед операцией -117,7±22,3%, на 4-е сутки - 133,8±25,2%, p<0,0001), что говорит о защитных механизмах свертывающей системы крови. При оценке прокоагулянтов наблюдалось высокое содержание фактора Виллебранда как маркера эндотелиальной дисфункции, перед операцией (228,3±69,1%) с постепенным снижением к 4-м суткам (114,5±34,1%). Концентрация фибриногена незначительно упала в точке 2, вероятно, вследствие интраоперационной кровопотери и возросла в точке 3 (до операции - 5,68±1,28 г/л; на 2-е сутки - 6,49±1,07 г/л, p<0,0001), что в целом характерно для послеоперационного периода. Активность фактора VIII как маркера активации гемостаза, значимо повышалась сразу после операции (перед операцией - 113,3±30,4%, через 3-5 ч - 122,3±30,7%, p<0,0001) с тенденцией к усилению свертывания, что может свидетельствовать об увеличении тромбогенного потенциала крови. Также значительно повышался уровень D-димера как маркера тромбинемии через 3-5 ч после операции (до операции - 2195±1482 мкг/л FEU, в точке 2 - 4735±2936 мкг/л FEU, p<0,0001), впоследствии уровень D-димера снижался, однако даже к 4-м суткам оставался на более высоком уровне по сравнению с референсными значениями для небеременных женщин.

Заключение. Анализ изменений отдельных компонентов системы гемостаза у женщин, родоразрешенных путем кесарева сечения, свидетельствует о гиперкоагуляционном состояния в до- и послеродовом периодах с тенденцией к нормализации. Однако у значительной части женщин даже на 4-е сутки после операции (к моменту выписки) наблюдались выраженные гиперкоагуляционные изменения, что требует динамического контроля системы гемостаза более длительное время.



Возможности масс-спектрометрии в дифференциальной диагностике пограничных опухолей яичников

Юрова М.В.1, 2, Чаговец В.В.1, Токарева А.О.1, Стародубцева Н.Л.1, Павлович С.В.1, 2, Хабас Г.Н.1, Шешко П.Л.1, Франкевич В.Е.1

1 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, 117997, г. Москва, Российская Федерация

2 Федеральное автономное образовательное учреждение высшего образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет), 119991, г. Москва, Российская Федерация

Актуальность. Пограничные опухоли яичников (ПОЯ) - новообразования с атипичной пролиферацией эпителия, наиболее характерные для пациентов репродуктивного возраста, желающих сохранить фертильность. Органосохраняющий объем вмешательства сопровождается рецидивированием в 35-50% случаев.

Цели - выявить отличия липидного профиля сыворотки крови пациентов с различными новообразованиями яичников; оценить возможность применения полученных данных для дифференциальной диагностики этих новообразований.

Материал и методы. С помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС) проведен анализ липидов сыворотки крови здоровых добровольцев (n=13), пациенток с эпителиальными опухолями яичников высокой степени злокачественности (n=28) и пограничными опухолями яичников (n=10), которые подверглись хирургическому лечению по поводу имеющегося у них новообразования яичников в условиях отделения инновационной онкологии и гинекологии ФГБУ "НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова" Минздрава России.

Результаты. В результате анализа липидных профилей пациенток с I-II стадиями рака яичников и пациенток с пограничными опухолями выявлены значительные отличия между рассматриваемыми группами. На основании обнаруженных отличий были построены OPLS-DA-модели (R2=0,88, Q2=0,66), позволяющие отнести пациенток к одной из исследуемых групп. Наибольший вклад в созданных моделях внесли 111 липидов. Отмечено значимое повышение уровней 52 липидов при пограничных опухолях.

Модель, характеризующая отличия пациенток с поздними III-IV стадиями рака яичников и пограничными опухолями (R2=0,79, Q2=0,27), построена на основании 114 характерных липидах. Зарегистрировано значимое повышение уровней 41 липида и снижение 7.

При сравнении липидного профиля здоровых добровольцев и сыворотки крови пациенток с пограничными опухолями выявлено 109 липидов со значимо отличающимися уровнями. Однако выход образцов за пределы эллипсов Хоттелинга на диаграмме счетов, а также противоречивые показатели оценочных параметров (R2=0,91, Q2=0,36) позволяют лишь наметить тенденции изменения метаболизма липидов в отношении данной группы пациенток, что потенциально может повлиять на повышение качества предоперационной диагностики данной группы - большинство женщин на момент установления диагноза находится в репродуктивном периоде (средний возраст - 36 лет) и заинтересовано в сохранении фертильности для реализации репродуктивной функции.

Заключение. Показана возможность дифференциальной диагностики пограничных опухолей яичников по липидному составу сыворотки крови, определенному с помощью масс-спектрометрии. Анализ липидома сыворотки крови позволяет различать профили крови пациенток с пограничными опухолями серозного рака яичника высокой степени злокачественности как ранних, так и прогрессирующих стадий.